原代細胞傳代技術(shù)

一、貼壁細胞的消化法傳代
1、吸除或倒掉瓶內(nèi)舊培養(yǎng)液。
2、加入1ml左右消化液（胰蛋白酶或與EDTA混合液）輕輕搖動培養(yǎng)瓶，使瓶底細胞都浸入溶液中。
3、消化2-5分鐘后把培養(yǎng)瓶放置在顯微鏡下進行觀察，發(fā)現(xiàn)原貼壁的細胞逐漸趨于圓形，在還未漂起時，棄去消化液，加入培養(yǎng)液終止消化。
4、用吸管將貼壁的細胞吹打成懸液，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。第二天觀察貼壁生長情況。

二、懸浮細胞的傳代
1、直接傳代
① 讓懸浮細胞慢慢沉淀在瓶底后，將上清吸掉1/2-2/3。
② 用吸管吹打形成細胞懸液后，分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。
2、離心法傳代
① 將細胞連同培養(yǎng)液一并轉(zhuǎn)移到離心管內(nèi)，離心800-1000rpm，5分鐘。
② 去除上清，加新的培養(yǎng)液到離心管內(nèi)，用吸管吹打使之形成細胞懸液。
③ 將細胞懸液分別接種到另外兩到三個培養(yǎng)瓶中，置37℃培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。