細胞凍存是細胞學(xué)研究中的重要內(nèi)容，而細胞凍存液的配制及使用方法對于細胞凍存的成功率有著非常重要的影響。傳統(tǒng)上，使用的是含有血清的細胞凍存液，但是血清的存在也會引發(fā)各種細胞培養(yǎng)難題，如批次之間的不一致性，提純與使用難度等等。為解決這些問題，近些年來，研究者們開發(fā)了不含血清的凍存液，但是，還不同于含有血清的凍存液有很多使用上的要點需要重視。 一、無血清細胞凍存液的物質(zhì)
細胞凍存液的成分和pH值是影響細胞凍存的重要因素。在無血清細胞凍存液中，3%甘油在保證細胞生存率的前提下，能夠緩解細胞因凍存造成的壓力。此外，DMSO、乙二醇和PEG等復(fù)合凍存液的存在，也影響細胞凍存后的生存率。因此，在配制無血清細胞凍存液的時候，需要注意成分的搭配，選擇合適的成分組合以及保證pH值的合理性。
二、無血清細胞凍存液的配制
在物質(zhì)的選擇基礎(chǔ)上，細胞凍存液的配制工作也非常關(guān)鍵。首先需要選擇高質(zhì)量的無菌去離子水，并將其高溫消毒。在消毒的過程中需要嚴格控制溫度和時間，以免富含礦物的水成分揮發(fā)或者水體中出現(xiàn)細菌。其次，將各種化學(xué)試劑按照一定比例搭配混合，調(diào)整pH值，配制成凍存液。在配制時，根據(jù)細胞的種類、生長狀態(tài)以及所需要遭受的物理、化學(xué)刺激程度，考慮不同配方時需要注意控制條件的嚴謹性以及方案的合理性。
三、細胞的凍存方法
凍存是細胞凍存中的核心環(huán)節(jié)。在進行凍存前，需要掌握熟練的操作技巧，并在保證無菌條件的基礎(chǔ)上，控制凍存過程的溫度和時間，以確保凍存后細胞的完整和生存率。具體來說，可以依次進行以下步驟：
1.將細胞進行離心處理，去除培養(yǎng)基，加入凍存液混合均勻；
2.按照一定比例分裝入凍存管中，密封好，放入冰箱，調(diào)低溫度；
3.升級冰箱的溫度，待冷卻后，放入冷凍機中；
4.讓樣品緩慢地降溫至-80℃，在-80℃的溫度下，待樣品逐漸進入冬眠狀態(tài)；
5.將樣品轉(zhuǎn)入液氮罐中，保存在液氮罐內(nèi)的-196℃下。
四、細胞的解凍方法
解凍是細胞凍存的另一個關(guān)鍵環(huán)節(jié)。良好的解凍方法是保障細胞后續(xù)生長和研究的前提。具體來說，解凍時需要遵循以下基本規(guī)則：
1.使用預(yù)先洗凈的工具，為防止細菌引入；
2.以恒溫水浴的方式進行解凍，溫度控制在37℃；
3.解凍完成后，將細胞液勻加入到預(yù)先配置好的培養(yǎng)基中；
4.對細胞進行適當?shù)臏囟?、溫度梯度和保護條件調(diào)節(jié)，進行培養(yǎng)。
五、無血清細胞凍存液使用的注意事項
無血清細胞凍存液使用時需要注意一些基本的操作細節(jié)，如：
1.在液氮罐中保存時間不宜過長，建議在持續(xù)不超過半年或一年的情況下使用；
2.凍存液可用于一定程序的連續(xù)凍存與解凍，但不能超過細胞耐受的極限；
3.注意無血清細胞凍存液的配方和制備成分，以及不同細胞的特殊要求；
4.合理利用凍存液的多余量，以防使用中不夠。
以上就是細胞凍存前必須知道的無血清細胞凍存液使用方法。在配制、凍存、解凍以及使用過程中，需要注意的方面非常多，尤其是對于孕育具有特殊功能的細胞而言，要想保證其活性，采用無血清細胞凍存液的使用方法。除此之外，還有其他方面需要詳細了解，相信在不斷的實踐中，我們能夠更加熟練、更加高效地開展細胞凍存工作。
