EMT6小鼠乳腺癌細(xì)胞

EMT6小鼠乳腺癌細(xì)胞

（1）請(qǐng)客戶收到細(xì)胞株產(chǎn)品后，立即對(duì)外包裝，細(xì)胞凍存管，細(xì)胞培養(yǎng)瓶等拍照，如有疑問(wèn)或問(wèn)題，須在24小時(shí)內(nèi)通知上海信裕生物科技有限公司，提供照片和書(shū)面說(shuō)明

（2.）請(qǐng)客戶在收到復(fù)蘇細(xì)胞后，迅速將原裝的細(xì)胞瓶放入細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置，3-4小時(shí)后，再使用傳代（注：請(qǐng)客戶觀看細(xì)胞狀態(tài)后。如若細(xì)胞已經(jīng)長(zhǎng)滿且貼壁好，也可靜止4小時(shí)左右后就傳代

（3.）請(qǐng)使用新配制的培養(yǎng)體系

（4.）請(qǐng)客戶培養(yǎng)細(xì)胞前三天，須對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)進(jìn)行拍照和注明時(shí)間，若細(xì)胞生長(zhǎng)存在質(zhì)量問(wèn)題，須向上海本公司提供培養(yǎng)生長(zhǎng)的照片和書(shū)面說(shuō)明。

（5.）請(qǐng)客戶仔細(xì)閱讀細(xì)胞說(shuō)明書(shū)，提前準(zhǔn)備好相應(yīng)的培養(yǎng)體系，避免造成細(xì)胞質(zhì)量問(wèn)題

EMT6小鼠乳腺癌細(xì)胞

注：（1），觀察細(xì)胞在低倍鏡（4或5X物鏡）下進(jìn)行，否則不能準(zhǔn)確判斷細(xì)胞的傳代密度。看細(xì)胞的形態(tài)請(qǐng)?jiān)?/span>10X或20X物鏡下。

(2)，瓶中運(yùn)輸培養(yǎng)基不能重復(fù)再用，請(qǐng)換用加雙抗或無(wú)雙抗的新培養(yǎng)基，細(xì)胞凍存后，培養(yǎng)基中可不加任何抗生素。

(3)，有些細(xì)胞貼壁不牢，如發(fā)現(xiàn)貼壁細(xì)胞脫落，可離心吹打后接種到新瓶?jī)?nèi)。

常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

1、培養(yǎng)瓶有破裂，培養(yǎng)液有漏液：極大可能會(huì)污染，所以我們會(huì)及時(shí)安排幫老師解決。  2、細(xì)胞漂?。号囵B(yǎng)瓶不開(kāi)封，瓶口酒精擦拭后平躺放置在培養(yǎng)箱。次日觀察，如細(xì)胞大部分又貼回瓶底，表明細(xì)胞活力正常，剩余漂浮的細(xì)胞可以去掉，留 10ml 培養(yǎng)液培養(yǎng)觀察，細(xì)胞生長(zhǎng)至匯合度 80%，進(jìn)行消化傳代；如細(xì)胞還是不貼壁，將細(xì)胞離心收集轉(zhuǎn)到新培養(yǎng)瓶，原培養(yǎng)瓶加部分培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)，中間注意觀察，我們的技術(shù)人員會(huì)一直跟蹤指導(dǎo)，直到問(wèn)題解決。

選擇正確的培養(yǎng)基：不同的細(xì)胞可能培養(yǎng)基不同，甚至不同的文獻(xiàn)可能對(duì)相同的細(xì)胞培養(yǎng)基成分也是可能不同的。如我當(dāng)時(shí)培養(yǎng)神經(jīng)干細(xì)胞，有文獻(xiàn)就選用neurobase培養(yǎng)基，而我的實(shí)驗(yàn)?zāi)康闹饕亲隹寡趸脱趸矫娴?，而這種培養(yǎng)基中含有抗氧化劑成分，此時(shí)，我就不得不選擇另外一種不含抗氧化劑的培養(yǎng)基。
瓶裝血清一定要逐步解凍: 4℃冰箱全溶后再分裝，在溶解過(guò)程中須規(guī)則搖晃均勻小心勿造成氣泡，使溫度與成分均一，減少沉淀的發(fā)生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解凍，因溫度改變太大，容易造成蛋白質(zhì)凝結(jié)而發(fā)生沉淀。
熱滅活是指56℃，30分鐘加熱已*解凍之血清。水浴鍋升到56℃后，將血清放入，待溫度升高到56℃后計(jì)時(shí)，一般5分鐘左右規(guī)則搖晃均勻一次。此熱處理之目的是使血清中之補(bǔ)體成份去活化。除非必須，一般不要作此熱處理，因?yàn)闀?huì)造成沉淀物之顯著增多，且會(huì)影響血清之品質(zhì)。注意更換新血清包括不同批次對(duì)細(xì)胞的影響?！炯?xì)胞縮寫(xiě)】"    EMT-6細(xì)胞
【背景資料】    見(jiàn)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)
【細(xì)胞來(lái)源】    細(xì)胞主要來(lái)源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少數(shù)國(guó)內(nèi)外著名大學(xué)建系
【代次】    P4
【規(guī)格】    復(fù)蘇T25培養(yǎng)瓶(一瓶)或凍存1ml凍存管（兩支）
"細(xì)胞凍存及復(fù)蘇基本知識(shí)普及：
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存，可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來(lái)，這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。而且適度地保存一定量的細(xì)胞，可以防止因正在培養(yǎng)的細(xì)胞被污染或其他意外事件而使細(xì)胞丟種，起到了細(xì)胞保種的作用。
除此之外，還可以利用細(xì)胞凍存的形式來(lái)購(gòu)買(mǎi)、寄贈(zèng)、交換和運(yùn)送某些細(xì)胞。細(xì)胞凍存時(shí)向培養(yǎng)基中加入保護(hù)劑--終濃度5%.15%的甘油或二甲基亞砜DMSO，可使溶液冰點(diǎn)降低，加之在緩慢凍結(jié)條件下，細(xì)胞內(nèi)水分透出，減少了冰晶形成，從而避免細(xì)胞損傷。 
采用""慢凍快融""的方法能較好地保證細(xì)胞存活。標(biāo)準(zhǔn)冷凍速度開(kāi)始為-1 到 -2℃/min，當(dāng)溫度低于-25℃時(shí)可加速，到-80℃之后可直接投入液氮內(nèi)-196℃。【細(xì)胞數(shù)】"    1*10（6）
【生物安全級(jí)別】    1
【生物體】    小鼠
【組織來(lái)源】    乳腺
【細(xì)胞形態(tài)】    上皮細(xì)胞樣
【細(xì)胞特性】    貼壁
【細(xì)胞活力】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
【細(xì)胞檢測(cè)】    細(xì)胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌